Ano: 1997
Título:
EXTRAÇÃO LÍQUIDO-LÍQUIDO DE XILANASE POR MICELA REVERSA
Palavra Chave: Biotecnologia Xilanase: Purificação Extração Líquido-Líquido: Micela Reversa
Autor: RODRIGUES, Eliana Maria Gonçalves
Orientador: Adriane Maria Ferreira Milagres
Banca
Examinadora:		 Adalberto Pessoa Júnior Beatriz Vahan Kilikian João Batista de Almeida e Silva
Resumo: O objetivo deste trabalho foi realizar a purificação de xilanase produzida pelo fungo Penicillium janthinellum por meio de extração líquido-líquido em micela reversa, utilizando um agente tensoativo aniônico (AOT) e um catiônico (BDBAC).
Conceitos de estatística multivariada com a aplicação da técnica do planejamento fatorial fracionário e completo foram utilizados, para realizar uma tiragem das variáveis que de fato são importantes para o processo de purificação da xilanase por micela reversa. Em seguida foi feita a quantificação dos níveis das variáveis significativas mediante o emprego da metodologia da superfície de resposta.
O trabalho resultou em dois modelos matemáticos principais, um que representa o uso do agente tensoativo aniônico (Y1), e outro que representa o agente tensoativo catiônico (Y2). 
Y1 = 8,75 – 4,31 A2 – 3,13C2

Y2 = 4,32 + 5,1B + 2,64D + 0,83B2 + 1,46D2

Sendo: 

Y1, Y2®rendimento em atividade; A=pH; B=BDBAC(mol/L); C=T(°C); D=Hexanol(%)

A partir do modelo que apresentou melhor recuperação (Y2 = 4m32 + 5,1B + 2,64D + 0,83B2 + 1,46D2), foi realizado uma ampliação de escala e utilizou-se a agitação como fator de ampliação, a qual manteve-se constante em 300rpm. As condições de ampliação foram as mesmas da extração e re-extração otimizadas pelo modelo. A extração foi ampliada 2,5, 6,25, 25 e 50 vezes, obtendo-se 17, 22, 15 e 13% de rendimento em atividade, respectivamente.
Foram também realizadas extrações do caldo enzimático pré-concentrado com sulfato de amônio a 50%. As condições de extração foram: tampão fosfato de sódio, pH 7,0, 0,10 M e BDBAC 0,2 M em isooctano/hexanol, na proporção de 92,5:7,5%. Esta condição resultou na purificação da xilanase obtendo-se um rendimento de 73% e fator de enriquecimento de 7 vezes. Após caracterização detectou-se em gel bidimensional a presença de 2 bandas de mesma massa molar (20,1kDa), e ponto isoelétrico de 6,0- e 6,5. As condições ótimas de ativação da enzima foram temperatura de 50°C e pH de 4,2.

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