| Ano: | 1998 | |||
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| Palavra Chave: | Biotecnologia | Precipitação | b -xilosidase | |
| Autor: | CORTEZ, Ely Vieira | |||
| Orientador: | Adalberto Pessoa Júnior | |||
| Banca
Examinadora: |
Adriane Maria Ferreira Milagres | Beatriz Vahan Kilikian | ||
| Resumo: | Neste trabalho foi utilizada a precipitação como técnica de recuperação das enzimas xilanolíticas produzidas por Penicillium janthinellum em hidrolisado hemicelulósico de bagaço de cana-de-açúcar. Inicialmente a precipitação dessas enzimas foi realizada por processo de batelada, com os seguintes agentes precipitantes: etanol (concentrações de 10, 20, 30, 40, 50, 60, 60, 70 e 80% v/v, pH 5,5 e a 4°C), sulfato de sódio (concentrações de 5, 15, 25, 40 e 60% p/p. pH 5,5 e a 25°C), sulfato de amônio e sulfato de amônio com metilcelulose (concentrações de sulfato de amônio de 10, 20, 30, 40, 50 e 60% da concentração de saturação: concentração de metilcelulose de 1% p/v; pH 5,5 e a 25°C). Foram precipitados aproximadamente 30% da proteína total com 40% de etanol, enquanto as xilanases permaneceram com 95% de atividade. Quase 100% da atividade xilanolítica foi recuperada com 80% de etanol. Com 50% de sulfato de amônio, precipitou-se toda a xilanase contida no meio, ao passo que com sulfato de amônio e metilcelulose foram necessários 40% de sulfato de amônio para obter o mesmo resultado. A máxima recuperação foi de 72% com 25% de sulfato de sódio. Em função dos resultados obtidos, realizou-se a precipitação com etanol em concentrações de 20, 40, 60 e 80% em diferentes valores de pH (4,6, 5,9, 6,3 e 7,0) e a 4°C, para comparar o comportamento da xilanase total com o da b -xilosidase, ambas presentes no meio. Em seguida foi realizada uma precipitação fracionada dessas enzimas, em três etapas, com etanol em concentrações de 20, 60 e 80%, em pH 4,5 e a 4°C. Aproximadamente 70% da proteína total do meio foi precipitada na primeira etapa (com 20% de etanol). A Segunda etapa (com 60% de etanol) permitiu recuperar 75% da b -xilosidase e aumentar a pureza 6 vezes. A massa molar da b -xilosidase recuperada foi estimada entre 104 e 110 kDa. Na terceira etapa da precipitação fracionada (com 80% de etanol), ocorreu a recuperação de 82% da xilanase total e a pureza aumentou 4,4 vezes. As massas molares das xilanases precipitadas na terceira etapa foram 20 e 30 kDa. As constantes cinéticas da b -xilosidase antes da recuperação (Km=1,07 mM e Vm=0,35 U/mL), indicando que a precipitação praticamente não causou alteração nesses parâmetros. | |||